上一周小編與大家一起分享了多肽的固相合成，固相合成得到的是粗品多肽，目前，在多肽合成中按照合成難易粗品純度一般在70-80%，較難合成的一般在40-60%，如何實(shí)現(xiàn)多肽粗品純度優(yōu)化到高純度，那就需要通過多肽的純化工藝來實(shí)現(xiàn)。只有純度越高的多肽產(chǎn)品才能實(shí)現(xiàn)完美的護(hù)膚或醫(yī)用功效，因此，純化的方法和工藝顯得尤為重要。

對(duì)于企業(yè)而言，建立高標(biāo)準(zhǔn)的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)成為多肽生產(chǎn)質(zhì)量控制的重要手段。湃肽在質(zhì)量控制方面按照制藥標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管控并成立了專研小組，專注于多肽的純化分析檢測優(yōu)化等相關(guān)工作，為多肽質(zhì)量保駕護(hù)航，助力提升客戶價(jià)值最大化。

關(guān)于多肽的純化方法，包括有毛細(xì)管電泳、離子交換色譜、質(zhì)譜及其聯(lián)用技術(shù)等多種純化技術(shù)，但在純化效果、制備效率等方面都存在一定的局限性。隨著色譜法分離純化技術(shù)的發(fā)展，反相高效液相色譜（RP-HPLC）以分離效果好、分辨率高、回收率高等特點(diǎn)，在多肽的分離純化制備中備受青睞，也是RP-HPLC目前液相色譜分離中使用最為廣泛的一種模式。

反相高效液相色譜法分離粗肽的色譜圖 

根據(jù)多肽產(chǎn)品在固定相和流動(dòng)相的分配系數(shù)，保留時(shí)間差異來分離提純產(chǎn)品。以流動(dòng)相為極性，固定相為非極性的液相色譜稱為反相色譜。特別適用于分子量低于5000以下的小分子肽的分離純化。同時(shí)需要確定不同結(jié)構(gòu)的多肽在柱上的保留情況（Wilce等人利用線性回歸方法對(duì)2106種多肽的保留性質(zhì)與結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析并總結(jié)）。

分辨率和回收率高，重復(fù)性好；

分離能力強(qiáng)，柱效高；

溶解能力大，操作簡便。

RP-HPLC是根據(jù)流動(dòng)相中被分離物質(zhì)分子疏水性的不同而發(fā)生強(qiáng)弱不同的相互作用，從而使不同分子在反相柱中彼此分離。

在多肽的RP-HPLC中，初始洗脫條件下洗脫液中有機(jī)成分濃度較低，分子與固定相疏水作用較強(qiáng)，幾乎完全被固定相吸附。而一旦洗脫液中有機(jī)成分達(dá)到特定濃度，使得多肽與固定相間作用小于流動(dòng)相與固定相間的作用時(shí)，分子完全從固定相上洗脫下來，幾乎不再與固定相發(fā)生作用。這一保留機(jī)制也被人稱為“on-off”機(jī)制。正是由于多肽這種特殊的保留機(jī)制，洗脫液成分極微小的改變就會(huì)大大影響多肽和蛋白質(zhì)的保留行為，從而保證疏水特征相近的多肽得以充分分離。

RP-HPLC流動(dòng)相常用含有0.1% 三氟乙酸（TFA）的水-乙腈（ACN）溶液體系。在分離純化制備多肽過程中，可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相和固定相的組成來提高分離效率，比如，改變樣品的離子對(duì)性質(zhì)、固定相分布的功能基團(tuán)、溫度、色譜柱粒徑及長度、流速等。 以上種種因素，使得RP-HPLC已成為一種被廣泛使用的分離模式，普遍用于多肽的分離純化中。

通過反相液相色譜吸附洗脫模型更為直觀了解RP-HPLC的分離純化原理。

①流動(dòng)相中的多肽進(jìn)入色譜柱；

②多肽吸附到反相表面；

③有機(jī)調(diào)節(jié)劑濃度達(dá)到臨界值時(shí)多肽從反相色譜柱上脫附下來。

在多肽制備過程中，純化是一項(xiàng)復(fù)雜繁瑣的工作，每一步都要經(jīng)過精細(xì)的操作，以得到高純度的多肽藥物原料。那么，多肽純化的具體工藝流程是怎樣的呢？用一張圖來直觀的告訴你~

由于合成過程中的一些可能的雜質(zhì)肽理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)與目標(biāo)多肽十分的相似，分離純化比較困難，這對(duì)純化技術(shù)的要求就非常高，看似簡單的95%和98%兩個(gè)純度，所費(fèi)的工藝和成本相差甚遠(yuǎn)，為了提高多肽純度，有必要和必需時(shí)還要進(jìn)行二次純化，這也是為什么多肽價(jià)格昂貴的原因。

浙江湃肽生物有限公司是一家致力于多肽產(chǎn)業(yè)化的國家高新技術(shù)企業(yè)，擁有全球領(lǐng)先的全固相合成多肽生產(chǎn)與開發(fā)工藝，專注于高技術(shù)壁壘的多肽原料藥研發(fā)及生產(chǎn)；擁有以多肽首席科學(xué)家Jim Xie博士和章博士為核心的超強(qiáng)研發(fā)技術(shù)團(tuán)隊(duì)，已成功研制了包括像亮丙瑞林、利拉魯肽、索馬魯肽等多個(gè)多肽原料，攻克了在合成端的技術(shù)壁壘和價(jià)格壁壘。憑借在多肽領(lǐng)域的研發(fā)優(yōu)勢、過硬產(chǎn)品質(zhì)量，獲得國內(nèi)、國際市場較高認(rèn)可。同時(shí)，湃肽一直堅(jiān)持匠心筑夢，品質(zhì)為先，力爭打造中國多肽領(lǐng)導(dǎo)品牌，持續(xù)為客戶提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和更專業(yè)的服務(wù)。

多肽產(chǎn)品的純化不僅靠技術(shù)，更靠技術(shù)工作人員的經(jīng)驗(yàn)的積累，根據(jù)多肽分析的圖譜的累積，建立多肽分離純化方法數(shù)據(jù)庫。這不是一朝一夕能做到能模仿的。湃肽在多肽合成領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富，技術(shù)平臺(tái)完備，擁有自己的方法數(shù)據(jù)庫，能更快的響應(yīng)客戶的需求，為您生產(chǎn)出最優(yōu)質(zhì)的多肽產(chǎn)品。